酶標板封閉前的清洗
酶標板或者又叫做一次性(細胞細菌)培養(yǎng)板,基本都是透明顏色,PS(聚苯乙烯)材料做成,一般根據(jù)酶標板與蛋白和其它分子結(jié)合能力的不同,分為高結(jié)合力,中結(jié)合力和氨基化的。
1)高結(jié)合力
此種酶標板,表面經(jīng)處理后,其蛋白結(jié)合能力大大增強,可達300-400ng lgG/cm2主要結(jié)合的蛋白分子量>10kD。使用該類酶標板可提高敏感性,并可相對減少包被蛋白的濃度和用量,不足之處為較易產(chǎn)生非特異性反應(yīng)??乖蚩贵w包被后,以非離子去污劑無法有效地封閉未結(jié)合蛋白的部位,需使用蛋白作為封閉劑。
2)中結(jié)合力
此類酶標板經(jīng)表面疏水鍵被動與蛋白結(jié)合,適合作為分子量>20kD的大分子蛋白的固相載體,其蛋白結(jié)合能力為200~300ng 1gG/cm2,由于該類酶標板所具有的僅與大分子結(jié)合的特性,適用于作為未純化抗體或抗原的固相載體,可降低潛在的非特異性交叉反應(yīng)。該類板可以惰性蛋白或非離子去污劑作為封閉液。
3)氨基化
這種酶標板經(jīng)表面改性處理后擁有帶正電荷的氨基,其疏水鍵由親水鍵取代。該類酶標板適合作為小分子蛋白的固相載體。使用合適的緩沖液和pH值,其表面可通過離子鍵與帶負電荷的小分子結(jié)合。由于其表面的親水特性和可通過其它交聯(lián)劑共價結(jié)合的能力,可用于固定溶于Triton-100、Tween 20等去污劑的蛋白分子。該類板的缺陷為由于降低了疏水性,一部分蛋白分子無法結(jié)合;此外,其表面需有效地封閉。由于親水和共價的表面特性,使用的封閉液必須能夠與非反應(yīng)性氨基基團和所選擇的交聯(lián)劑中任何功能基團發(fā)生作用。
等離子體清洗可以對酶標板材料的整體、局部或復(fù)雜結(jié)構(gòu)部分進行清洗;在完成清洗去污的同時,還可以改善材料本身的表面性能。如提高表面的潤濕性能、改善膜的黏著力等,這在酶標板的加工制造過程中是非常重要的
聚苯乙烯酶標板經(jīng)等離子接枝處理后,能在基體表面引入醛基、氨基、環(huán)氧基等活性官能團,提高基體表面的浸潤性、表面能,使酶牢牢地固定在載體上面,提高酶的固定性。經(jīng)達因筆測試,PS材料處理前是38達因左右,處理后是72達因左右,表面張力值得到極大的改善。